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一步法荧光定量RT-PCR试剂盒图片
产品货号:
ALH195
中文名称:
一步法荧光定量RT-PCR试剂盒
英文名称:
LabScript One-Step qRT-PCR Kit
产品规格:
125T|250T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本试剂盒采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real-Time qRT-PCR实验,可在同一反应管内连续进行,反应过程中无需打开管盖添加试剂并可对扩增产物进行实时检测,避免了污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。非常适合于微量RNA尤其是微量RNA病毒的检测。


本试剂盒包括最佳配比优化的One-Step Enzyme Mix(包含突变改造LabScript M-MuLV逆转录酶、HotMaster Taq DNA聚合酶和RNase抑制剂),同时包含适用于逆转录和荧光PCR扩增的2×SYBR qRT-PCR Mix。LabScript M-MuLV逆转录酶缺失了RNase H活性,与普通M-MuLV相比,具有更强的延伸能力和稳定性。同时该酶提高了耐热性,可以在42~50℃反转录,提高了复杂二级结构,GC含量丰富模板反转录效率。而采用优质热启动酶HotMaster Taq DNA聚合酶可以最大限度的减少PCR扩增全程中的非特异性扩增产物产生,大大提高了荧光定量PCR反应的精确性。


本制品可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,对靶基因进行准确定量检测,重复性好,可信度高。




组分125T250T
2×SYBR qRT-PCR Mix1.25mL2×1.25mL
LabScript One-Step Enzyme Mix100μL200μL
RNase-free H2O1.5mL1.5mL

储存条件:-20℃,有效期12个月。


  • 高拷贝、低拷贝基因检测;
  • 部分高GC含量或具有复杂二级结构的RNA模板。



  • 当同时需要进行数次Real-Time One-Step qRT-PCR反应时,应先配制各种试剂的混合液(MasterMix,其中包括RNase-free ddH2O、Buffer、各种酶等),然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验样品之间产生的误差。
  • 使用LabScript Enzyme Mix时,分取之前要小心地瞬间离心收集到反应管底部;由于酶保存液中含有高浓度的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。
  • 2×SYBR qRT-PCR Mix内含SYBR Green I,保存或配制One-Step qRT-PCR反应液时应避免强光照射。
  • 本制品不含Rox Reference Dye,部分需要用Rox染料校准孔间差异的荧光定量PCR仪器可另外选购RoxReference Dye。
  • 为保证反应成功建议使用高质量的RNA模板。
  • 不同的片段,所需最佳RNA模板用量不同,过多的RNA会抑制反应,建议根据反应调整模板用量。
  • 只能使用特异性引物,不能使用Oligo(dT)和Random Primer进行反应。



  • 根据下表冰上配制反应液(20μL):
    成分用量终浓度
    2×SYBR qRT-PCR Mix10μL
    Forward Primer(10μM)0.4μL0.2μM
    Reverse Primer(10μM)0.4μL0.2μM
    LabScript One-Step Enzyme Mix0.8μL-
    RNA模板X μL1pg~1μg
    RNase-free H2O至20μL-
    • 引物浓度请以终浓度0.2~0.6μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
    • 如果同进行多个反应,先按比例配成混合液,振荡混匀后,按每管(20-X)μL (X为模板量)分装。
  • 将配制好的反应体系混匀、离心后。
  • 将PCR仪器预热到42℃,将PCR管置于荧光定量PCR热循环仪中,按以下反应条件进行反应。
    温度时间循环数
    42℃20~30分钟1
    94℃2~3分钟1
    94℃20秒35-40
    55~60℃20秒
    72℃20秒
    根据需要加入融链曲线分析
    • 如果所采用的荧光定量PCR仪器没有特殊的要求,建议采用上述图表显示的标准的三步法PCR反应程序,如果使用该程序得不到良好的实验结果时,再进行PCR条件的优化,例如采用两步法进行扩增可以减少非特异扩增,增强扩增的特异性。
  • 实验结果分析:反应结束后确认One-Step qRT-PCR的扩增曲线和融解曲线,进行qRT-PCR定量时制作标准曲线等。

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